2-NBDG 葡萄糖摄取/转运荧光探针/脱氧葡萄糖类似物

  • 方, 青
  • 2019年8月14日
  • 技术专栏
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产品关键词:

2-NBDG;6-NBDG;Glucose uptake and transport probe 葡萄糖摄取和转运探针;Cell viability 细胞活力指示剂;Topical contrast reagent 局部对比试剂;3T3-L1 adipocytes 小鼠脂肪细胞;C2C12 muscle cells 小鼠成肌细胞;CAS:186689-07-6;

基本描述:

2-NBDG,英文全名2-Deoxy-2-[(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]-D-glucose,CAS NO:186689-07-6,一种脱氧葡萄糖类似物的荧光素,常常用来直接监测活细胞和组织对葡萄糖的摄取,判断细胞活力的指标之一。还可用作监测瘤形成的一种局部对比试剂。可用实时共聚焦、高分辨率或宽视野荧光显微镜,以及流式细胞仪来检测。尽管2-NBDG荧光对环境比较敏感,但约在465/540nm下表现出最大激发和最大发射波长,使用荧光素(如FITC)的光学滤片来进行结果观察即可。

葡萄糖摄取研究(Glucose uptake assay)用的细胞工具:

葡萄糖摄取由脂肪细胞(Adipose cell)和肌肉细胞(Muscle cell)来完成。最好的脂肪细胞研究工具是分离自附睾脂肪(epidydimal fat)的原代脂肪细胞,但非常难转染和培养。一般选择分化后的3T3-L1脂肪细胞作为金标准。

常用的还有:L6细胞(大鼠成肌细胞);C2C12细胞(小鼠成肌细胞);PC12细胞(相对较少);

【注意】:我司提供以上细胞系,需要的话可致电要求相关信息。

应用文献:

1、实验目的:为了研究棕榈酸盐(palmitate)诱导的胰岛素抵抗细胞内加入silibinin是否会影响胰岛素介导的葡萄糖摄取能力,使用特异性的荧光探针2-NBDG来进行研究。

细胞类型:棕榈酸处理的C2C12成肌细胞;

摄取方法:2-NBDG(50μM),孵育20min;

检测方法:荧光酶标板,Ex/Em=485nm/535nm;

参考文献:Li HB, et al. Silibinin improves palmitate-induced insulin resistance in C2C12 myotubes by attenuating IRS-1/PI3K/Akt pathway inhibition. Braz J Med Biol Res. 2015 May; 48(5):440-6.

2、实验目的:为了研究新发现化合物F12016(选择性的PPARγ激动剂)对胰岛素刺激的成脂细胞对葡萄糖摄取能力,使用特异性的荧光探针2-NBDG来进行研究。

细胞类型:成熟的小鼠3T3-L1成脂细胞;

摄取方法:2-NBDG(1mM),孵育1h;

参考文献:Chang Liu, et al. Corrigendum: Identification of a novel selective agonist of PPARγ with no promotion of adipogenesis and less inhibition of osteoblastogenesis. Sci Rep. 2015; 5: 12185.

3、实验目的:为了研究ox-LDL(氧化低密度脂蛋白)修复成脂细胞的胰岛素反应,使用特异性的荧光探针2-NBDG来进行葡萄糖摄取(glucose uptake)研究。

细胞类型:成熟的小鼠3T3-L1成脂细胞;

摄取方法:2-NBDG(100μM),孵育5min;

参考文献:Kennedy DJ, et al. A CD36-dependent pathway enhances macrophage and adipose tissue inflammation and impairs insulin signaling. Cardiovasc Res. 2011 Feb 15; 89(3):604-13.

4、 实验目的:为了研究黄芩素(baicalein)在小鼠3T3-L1的成脂分化过程的作用机制,通过葡萄糖摄取探针2-NBDG来研究其在葡萄糖代谢中的效应。

细胞类型:成熟的小鼠3T3-L1成脂细胞(诱导分化后的脂肪细胞);

摄取方法:2-NBDG(150μg/ml=438μM),37℃孵育30min;

参考文献:Nakao Y et al. Suppression of Very Early Stage Of Adipogenesis by Baicalein, a Plant-Derived Flavonoid through Reduced Akt-C/EBPα-GLUT4 Signaling-Mediated Glucose Uptake in 3T3-L1 Adipocytes. PLoS One. 2016 Sep 26;11(9): e0163640. PMID: 27669565

5、实验目的:为了研究经不同浓度HED或HED钠盐处理的分化后Caco-2细胞的葡萄糖摄取(glucose uptake),使用2-NBDG进行研究。

细胞类型:已分化的Caco-2细胞

摄取方法:2-NBDG(200μM),37℃孵育30min;

参考文献:Lieder B et al. The flavanone homoeriodictyol increases SGLT-1-mediated glucose uptake but decreases serotonin release in differentiated Caco-2 cells. PLoS One. 2017 Feb 13;12(2):e0171580. PMID: 28192456

产品特性:

1)CAS NO:186689-07-6

2)同义名:NBD-Glucose; 2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)Amino)-2-Deoxyglucose; 2-Deoxy-2-[(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]-D-glucose

3)分子式:C12H14N4O8

4)分子量:342.26

5) 纯度:≥98% (mixture of α and β)

6)外观:灰白色或橘色固体

7)溶解性:溶于DMSO(10mg/ml)、无水乙醇(20mg/ml)、溶于PBS,pH 7.2(10mg/ml)

8)化学结构图:

常见问题(FAQs):

1、2-NBDG或6-NBDG的储存液制备方法?

往1mg粉末内加入100μl无水DMSO或乙醇,充分溶解混匀,制备成10mg/ml储存液,按照单次用量分装后,置于-20ºC避光冻存。若配制成水溶液溶液,建议存放不要超过一天。

若需要延长保存周期,可以粉末形式置于-20ºC保存。先用乙醇溶解粉末,然后分装成小量装入独立瓶内,使用真空泵将溶剂抽干即可。此时不推荐用DMSO或DMF为溶剂,因挥发性比较差。

2、2-NBDG或6-NBDG的工作浓度?

2-NBDG的常用工作浓度范围10-600μM。细菌和酵母菌染色建议工作浓度范围为100-600μM,原代和传代培养哺乳动物细胞建议工作浓度范围为10-200μM。

6-NBDG的常用工作浓度范围30-300μM。

细胞在合适的温度和时间内孵育,以充分检测绿-黄色荧光。摄取能力强弱受温度影响,孵育时间有几秒钟,到30min,甚至更长,取决于探针终浓度、细胞类型、培养条件和一些其他因素。

3、2-NBDG或6-NBDG葡萄糖摄取检测的细胞类型?

2-NBDG或6-NBDG可用来直接监测正常细胞、恶性细胞、良性细胞内的葡萄糖摄取,细胞类型从细菌[1-2],到酵母菌[3-4],到哺乳动物细胞[5-7],到植物细胞[8]

[1] Yoshioka K et al. Intracellular fate of 2-NBDG, a fluorescent probe for glucose uptake activity, in Escherichia coli cells. Biosci Biotechnol Biochem. 1996 Nov;60(11):1899-901. PMID: 8987871

[2] Natarajan A et al. Dynamics of glucose uptake by single Escherichia coli cells. Metab Eng. 1999 Oct;1(4):320-33. PMID: 10937825

[3] Yoshioka K et al. Evaluation of 2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino]-2-deoxy-D-glucose, a new fluorescent derivative of glucose, for viability assessment of yeast Candida albicans. Appl Microbiol Biotechnol. 1996 Nov;46(4):400-4. PMID: 8987729

[4] Oh KB et al. Rapid viability assessment of yeast cells using vital staining with 2-NBDG, a fluorescent derivative of glucose. Int J Food Microbiol. 2002 Jun 5;76(1-2):47-53. PMID: 12038577

[5] Aloj L et al. Glut-1 and hexokinase expression: relationship with 2-fluoro-2-deoxy-D-glucose uptake in A431 and T47D cells in culture. Cancer Res. 1999 Sep 15;59(18):4709-14. PMID: 10493529

[6] Lloyd PG et al. Examining glucose transport in single vascular smooth muscle cells with a fluorescent glucose analog. Physiol Res. 1999;48(6):401-10. PMID: 10783904

[7] Román Y et al. Confocal microscopy study of the different patterns of 2-NBDG uptake in rabbit enterocytes in the apical and basal zone. Pflugers Arch. 2001 Nov;443(2):234-9. PMID: 11713649

[8] Bandmann V et al. Clathrin-independent endocytosis contributes to uptake of glucose into BY-2 protoplasts. Plant J. 2012 May;70(4):578-84.

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货号 产品名称 规格 CAS NO. 价格(元) 货期
MX4511-1MG 2-NBDG 葡萄糖摄取荧光探针 1mg 186689-07-6 616 现货
MX4511-5MG 2-NBDG 葡萄糖摄取荧光探针 5mg 186689-07-6 2100 咨询
MX4512-1MG 6-NBDG 葡萄糖摄取荧光探针 1mg 108708-22-1 1465 咨询

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货号 产品名称 规格 价格(元) 货期
MX0902-25MG Insulin, from Bovine Pancreas 牛胰岛素 25mg 350 现货
MX0904-25MG Insulin, Human Recombinant 重组人胰岛素 25mg 398 现货
MX0904-100MG Insulin, Human Recombinant 重组人胰岛素 100mg 1298 现货

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅能用作科研用途,不可他用。

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】