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Thermo/赛默飞世尔

• 多品牌运营
• 直接服务中国市场
• 全方位服务

赛默飞世尔科技是科学服务领域的领导者。公司年销售额超过200亿美元，在全球拥有约65,000名员工。公司使命是携手客户，让世界更健康、更清洁、更安全。帮助客户加速生命科学领域的研究、解决在分析领域所遇到的复杂问题与挑战，促进医疗诊断发展、加速药物上市进程、提高实验室生产力。

赛默飞借助于首要品牌Thermo Scientific、Applied Biosystems、Invitrogen、Fisher Scientific和Unity Lab Services，领先推出结合创新技术、便捷采购和全方位服务的整体解决方案。

赛默飞世尔科技进入中国发展已超过35年，在中国的总部设于上海，并在北京、广州、香港、成都、沈阳、西安、南京、武汉、昆明等地设立了分公司，员工人数超过4000名。主要产品包括分析仪器、实验室设备、试剂、耗材和软件等，提供实验室综合解决方案。

目前公司有6家工厂分别在上海、北京和苏州运营，在全国还设立了5个应用开发中心，将世界级的前沿技术和产品带给中国客户，并提供应用开发与培训等多项服务；

Thermo/Thermofisher产品丨探针类产品热卖

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品牌专栏

Thermo产品资讯及品牌动态 

赛默飞携全球首发新品重磅亮相第二届进博会

赛默飞世尔科技携多款重磅全球首发新品亮相第二届中国国际进口博览会，全面展示其在学术科研、医疗健康与精准医……

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赛默飞中国首家生命科学客户探索中心在上海启用

赛默飞世尔科技宣布其中国首家生命科学客户探索中心（BioSciences Customer Exploration Center, BEC）正式启用……

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咨询与问答

Thermo产品常见问题及使用指导

常见问题

我想用钙黄绿素染料标记整个细胞。我可以借此跟踪我的细胞多久，我可以固定它们吗？

钙黄绿素染料扩散到细胞中，“AM”部分由细胞酯酶切割，随后可以在细胞质中观察到而未结合任何胞内成分。这意味着它们标记了“整个细胞”。但是这也意味着它们可以通过正常细胞的外排机制被泵出。有时这一过程时间很短，尤其是显示出抗药性类型的细胞，除非外排被抑制（如使用丙磺舒抑制外排）。这也意味着染料不能被醛类固定剂所交联（不同于蛋白质结合CellTracker™染料），因此染料会在固定时丢失。此外，质膜的任何干扰（例如去垢剂或胰蛋白酶处理）都会导致染料从细胞中渗漏。

我能在成像实验中检测膜联蛋白V染色么？

膜联蛋白V染色一般不用于成像实验；而是流式细胞仪分析的最佳试剂。所有的细胞染色程度都会相近，因此很难从暗的非凋亡细胞中分辨出相对明亮的膜联蛋白V染色的细胞。使用我们的CellEvent™ Caspase 3/7 或Image-iT™ LIVE Caspase检测试剂盒检测caspase酶活化，这是用于成像实验最佳的方法。

进行细胞凋亡研究我需要设置哪些对照组？

您应该设置凋亡细胞对照和死亡细胞对照。常用于产生细胞凋亡的试剂是十字孢碱，喜树碱和缬氨霉素。其他处理产生凋亡细胞的一般药品列于下表。并不是每个试剂都会在每种类型的细胞中诱导细胞凋亡，需要优化使用的浓度和接种孵育时间。根据选择的试剂和使用的浓度，特异蛋白诱导的最高产量出现在处理后的8–72小时的任何时间内。 

Click-iT™ Plus和初代Click-iT ™试剂盒的不同之处是什么？

Click-iT™ Plus实验使用了一个修饰的甲基吡啶叠氮化物染料且降低铜离子浓度并加入了特别的铜离子保护剂，其将铜离子置于嵌入的炔烃基团位置因而降低了铜对生物分子的损伤。初代Click-iT™试剂盒使用非修饰叠氮化物染料和高铜离子浓度来进行连接反应，这可能抑制酶的活性，包括HRP和会淬灭GFP、RFP、mCherry及其他荧光蛋白的荧光，也包括R-藻红蛋白。如果您不希望修改您的抗体染色方案或拥有荧光蛋白表达细胞，就使用Click-iT™ Plus试剂盒。

alamarBlue™试剂能用于哪些类细胞？

alamarBlue™试剂适用于多种不同种类细胞：哺乳类动物、鸟类、两栖类动物、鱼类、硅藻属、细菌、植物细胞、真菌等，以及其他细胞样品，例如无限增殖培养细胞、原代培养细胞、癌细胞、干细胞等。同时，该试剂还可用于测定组织样品活性，例如心脏瓣膜和AlgiMatrix™ 3D矩阵中培养的细胞。这类应用有许多参考文献。您可以通过搜索alamarBlue™和您的目的细胞类型来找到它们。

哪些因素会导致台盼蓝形成沉淀？

台盼蓝染料接触光线后可能会降解，这些污染物可能会促进形成沉淀。经过冷藏或冷冻后，台盼蓝也可能形成橙/红纤维状聚合物。

用荧光染料标记蛋白，几乎无法检测到荧光。这表示标记未成功么？

不尽然。当太多的染料附着在分子上，产生染料间的淬灭，可能就会观测到低水平的荧光输出。同时，如果荧光团偶联到不适于其荧光输出的微区域或附近时，也会导致低荧光。这种现象更易发生在环境敏感型染料中，但是也会出现在非环境敏感型染料中。例如，偶联太靠近芳香族氨基酸或一串芳香族氨基酸，或者偶联太靠近一些碱基会导致淬灭。

标记程度（DOL）测定有助于估计真正偶联到分子上的染料水平，并帮助解决导致信号强度低的问题。

我发现点击标记样品无信号或特异性信号非常低，如何提高信号？

• 当铜离子在合适的化合价时，点击反应才有效。除了DIBO炔烃-叠氮化物反应外，在缺乏铜离子的条件下，叠氮化物和炔烃不会相互反应。确保在制备之后、二价铜(II)浓度最高时，立即使用点击反应混合物。 
• 不要使用已经变黄的添加剂缓冲液；其必须无色状态下才有活性。  
• 为确保TdT酶和点击反应试剂能够到达核内，细胞需要充分地固定和通透。为确保有足量的TdT能进入，组织样品需要用蛋白酶K或其他蛋白水解酶消化。
• 部分试剂能结合到铜离子上，并减少其足以催化点击反应的有效浓度。click反应前，不要在任何缓冲液或试剂中引入任何金属螯合剂（例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等）。避免缓冲液和试剂中引入其他可能被氧化或还原的金属离子。进行click反应前，可能需要向细胞或组织样品加入额外的洗涤步骤。 
• 您可以用新鲜的试剂再次进行点击反应，从而提高信号。将点击反应的时间延长至超过30分钟，并不会提高信号。用新鲜的点击反应试剂再次进行30分钟的孵育，可更有效地提高标记效率。 
• 自己的细胞可能没有凋亡。准备一份DNase I处理的阳性对照，验证TdT酶反应和点击标记反应是否正确进行。

技术咨询

文献引用

Thermo产品出现在各种类型实验中

Xiang CC, Kozhich OA, Chen M, Inman JM, Phan QN, Chen Y, Brownstein MJ.Amine-modified random primers to label probes for DNA microarrays.Nat Biotechnol (2002) 20:738-742.PMID:12089562

Young CE, Yang CR.Dopamine D1/D5 receptor modulates state-dependent switching of soma-dendritic Ca2+ potentials via differential protein kinase A and C activation in rat prefrontal cortical neurons.J Neurosci (2004) 24:8-23.PMID:14715933

Caceres, C; Yung, V; Araya, P; Tognarelli, J; Villagra, E; Vera, L; Fernandez, J.Complete nucleotide sequence analysis of a Dengue-1 virus isolated on Easter Island, Chile.Archives of Virology 2008 10:1967-1970