Calcein 钙黄绿素（常用的活细胞荧光探针）专题
（标签：多种颜色，蓝色、绿色，红色，深红色，多标实验）
产品关键词：
Calcein, AM 钙黄绿素（绿色）；Calcein Red 钙黄绿素红；Calcein Deep Red 钙黄绿素深红；碘化丙啶；CAS：148504-34-1；
背景介绍：
Calcein, AM，中文名钙黄绿素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，是最受欢迎的荧光探针之一，用来标记和监测活细胞的细胞功能。具有细胞膜渗透性，一旦进入细胞，被细胞内酯酶水解为钙黄绿素（Calcein），产生强烈的绿色荧光（Ex/Em= 490nm/515nm）。因不具细胞膜渗透性，从而能被保留在细胞内。
然而，Calcein, AM的单一荧光使其很难用于多标实验，特别是Calcein与GFP完全重叠的荧光光谱，使其不可能用在GFP转染细胞的多色标记实验。为了克服这一缺陷，我司懋康生物开发出Calcein Red和Calcein Deep Red两种类似物，使其能够替代Calcein AM用在活细胞的标记和功能分析的多重标记研究。
几种探针的基本特征：
表1 几种钙黄绿素（Calcein）系列探针的光谱特征
| 指示剂 | 指示剂编号 | Ex/Em（nm） | 检测滤片 |
| Calcein, AM 钙黄绿素（绿色） | MX3011-50UG | 490/515 | FITC |
| Calcein Red, AM 钙黄绿素红（红色） | MX3013-1MG | 560/574 | TRITC，Cy3 |
| Calcein Deep Red Acetate 钙黄绿素深红醋酸盐 | MX3014-1MG | 646/659 | Cy5 |
| Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝（蓝色） | MX3015-1MG | 360/445 | DAPI |
应用图片：
文献1：Yoshinori Hiraoka et al. Rapid Assessment of the Physiological Status of the Polychlorinated Biphenyl Degrader Comamonas testosteroni TK102 by Flow Cytometry. Appl Environ Microbiol. 2002 Apr; 68(4): 2031–2035.
图1：睾丸酮丛毛单胞菌（C. testosteroni）菌株TK102经Calcein, AM，PI双染后的荧光显微检测图片。（A）活细胞，仅有绿色荧光；（B）死细胞，仅有红色荧光；（C）透化处理细胞，中心是红色荧光，外缘是绿色荧光。
Fig 2. HeLa活细胞经Calcein Red（# MX3013）染色图。
操作流程（以Calcein Red，#MX3013为例）：
A， 储存液制备
储存液配制范围可为1～5 mM，具体根据工作浓度来决定，建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM，那么可配制5mM的储存液，即往1mg Calcein Red AM（Mw：1015.79）内加入196 μl 细胞培养级别的DMSO（货号：MS4601-100mL）即可。储存液需要根据单次用量分装，-20℃避光干燥保存，一定要避免受潮，此种情况下可稳定保存数月。
B，20% Pluronic F-127制备【可选】
称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。
C，染色步骤
大多数实验体系中Calcein Red AM的工作浓度为2-5μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein Red AM的最佳工作浓度，以最低的探针浓度得到最好的荧光结果为筛选原则。
1） 取一管适量分装的储存液（1000×）置于室温，至少回温20min，低速离心后，用合适的缓冲液如PBS，HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。
【注意】：有时可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127到Calcein Red AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前，取一管Calcein Red AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的终浓度为0.02%。加入Pluronic F127的Calcein Red AM溶液不可长期保存，需现配现用。
2） 对于贴壁细胞，先用胰酶-EDTA消化细胞，离心收集细胞（1000 rpm，3min）。对于悬浮细胞，直接离心收集细胞。
3） 去上清，用PBS（或者其他缓冲液）清洗细胞2~3次，以充分去除残留的酯酶活性。
4） 用1/10细胞培养基体积的Calcein Red AM染色工作液重悬细胞，37℃孵育20min～1h。
【注意】：1）若细胞自身含有机阴离子转运体，需加入丙磺舒（1-2.5mM）或者苯磺唑酮（0.1-0.25mM）到孵育体系内以降低去酯化的Calcein Red泄露到胞外；2）降低探针加载温度，可能会减少探针区室化现象。
5） 用PBS（或者其他缓冲液）洗涤细胞两次去除多余染料。
【注意】：如有必要，使用含有机阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗；
6） 用含合适滤光片（Ex/Em= 560nm/574nm）的仪器进行检测。
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
| Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素（绿色，超纯级别） | MX3011-50UG | 50μg | 210（促销价） |
| Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素（绿色，超纯级别） | MX3011-250UG | 5×50μg | 920（促销价） |
| Calcein Red, AM 钙黄绿素红（红色） | MX3013-1MG | 1mg | 2500 |
| Calcein Deep Red Acetate 钙黄绿素深红醋酸盐 | MX3014-1MG | 1mg | 2500 |
| Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝（蓝色） | MX3015-1MG | 1mg | 1200 |
【好消息】：目前最高纯度的钙黄绿素乙酰甲酯（Calcein, AM，HPLC＞97%）限时促销开始啦，本促销最终解释权归上海懋康生物科技有限公司。本品长时间销售供货给国内各大科研机构，以质优价优获得各老师的青睐。50μg单只特惠包装，按照5μM的工作浓度，用于96孔板内活细胞检测（工作体积100μl）可以做100个样本。单个样本检测成本仅2元，非常划算。
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| 货号 | 名称 | 规格 |
| MX3012-500T | Calcein AM/PI Double Stain Kit 活细胞/死细胞双染试剂盒 | 500T |
| MZ8471-1G | Probenecid 丙磺舒 | 1g |
| MZ8472-154MG | Probenecid Sodium, Water Soluble 丙磺舒钠（水溶性） | 2×77mg |
| MX4205-10MG | Propidium Iodide 碘化丙啶 | 10mg |
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅能用作科研用途，不可他用。
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】