SYTOX Blue Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO)
蓝色荧光核酸染料
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
| SYTOX Blue Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO) | MX4242-50UL | 50µl | 1450 |
产品描述
SYTOX Blue核酸染料（SYTOX Blue Nucleic Acid Stain），是一种高亲和力的核酸染料，轻易渗透进入受损的细胞质膜，但不能穿透活细胞膜。探针只需简单孵育，使用汞弧灯（Mercury arc lamp）的436nm光谱线进行激发，死细胞的核酸则呈明亮的蓝色荧光。结合以上特征，以及荧光增强＞500倍（与核酸结合）的优点，使其成为一种简单且定量的一步法死细胞指示剂，当用荧光显微镜、荧光光度计、荧光酶标板和流式细胞仪（安装有弧灯）检测。SYTOX Blue这一死细胞核酸染料可与具对比颜色（比如：绿色、红色、深红色荧光）的表面标记联合使用，用于多指标分析。
本品以DMSO储存液形式提供，浓度为5mM。只需用合适的生理缓冲液稀释到工作浓度进行简单孵育即可。适用于哺乳动物细胞、细菌和酵母菌。
产品特性
1） 同义名：SYTOXBlue dye；SYTOXBlue死细胞染料；SYTOXBlue细胞核染料；
2） 外观：黄色溶液
3） 荧光特征：Abs/Em=444/480nm（与DNA结合）（图1），需注意细菌或真核细胞中SYTOXBlue的光谱特征可能发生变化。
4）渗透性：不能进入活细胞
保存与运输方法
保存：-20℃避光干燥保存，亦可置于-80℃避光干燥保存，至少1年有效。
运输：冰袋运输。
使用案例（来自文献，仅做参考）
文献来源1）Truernit, E., Haseloff, J. A simple way to identify non-viable cells within living plant tissue using confocal microscopy. Plant Methods 4, 15 (2008). https://doi.org/10.1186/1746-4811-4-15
实验目的：测试长时期孵育后，SYTOX染料（包括：SYTOX Blue）是否仍特异性检测无活力细胞。
染色对象：拟南芥根部 染色剂量：SYTOX Blue（250nM）
Fig 1. Specificity of SYTOX dyes after longer staining times.Shown are roots stained for 20 min with SYTOX green (A), blue (B), or orange (C). All dyes stain most brightly the non-viable cells at the end of the lateral root cap. SYTOX green and SYTOX blue show slight background staining in the rest of the root. All images are overlay projections of CLSM images. Scalebars: 100 μm.
文献来源2）Shi T, van Soest DMK, Polderman PE, Burgering BMT, Dansen TB. DNA damage and oxidant stress activate p53 through differential upstream signaling pathways. Free Radic Biol Med. 2021 Aug 20;172:298-311. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2021.06.013. Epub 2021 Jun 16. PMID: 34144191.
实验目的：使用Calcein AM/SYTOXblue的组合来检测细胞活力。Calcein AM染活细胞，SYTOX Blue染死细胞。
实验方法：1×104RPETert and RPETert p53 KO cells接种在96孔板，第二天细胞用二酰胺（diamide）、H2O2 或NCS处理72h，之后加入Calcein AM/SYTOXblue混合染料（浓度分别是1 μM），37℃避光孵育30min，用Spectra Max Fluorometer测定荧光值（Calcein AM：Ex/Em=485/535nm；SYTOXblue：Ex/Em=444/460nm；）
Fig 2. Single-molecule rolling-circle replication assays. (B) Kymograph of an individual DNA molecule undergoing leading- and lagging-strand replication. The gray indicates the fluorescence intensity of dsDNA stained by SYTOX orange.
染色流程（更多内容见说明书）
以下步骤适用于任何细胞类型，需注意不同细胞类型所需的探针工作浓度范围有差异（见表2）。生长培养基、细胞密度、是否存在其它细胞、和其它因素都可能影响染色。总的来说，不在磷酸盐的缓冲液中能得到最好的结果。玻璃器皿上残留的去污剂也有可能影响许多有机体的真实染色，导致含或不含细胞的溶液中都能发现明亮荧光的材料。确保用温和去污剂来清洗玻璃器皿，用热自来水完全冲洗干净，最后用去离子水清洗数次。
| 表2. SYTOXBlue染色不同细胞的建议工作浓度 | ||
| 细胞类型 | SYTOXBlue浓度 | 孵育条件 |
| 细菌 | 0.5-5 µM | 涡旋混匀，之后孵育5min以上 |
| 酵母 | 1-50 µM | 孵育10min以上，周期性摇晃管子 |
| 其它真核细胞 | 10 nM-1 µM | 孵育10min以上， |
注意事项
1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集麒生物/MKBio懋康所有】
