PKmito ORANGE (PKMO) 活细胞线粒体荧光探针

PKmito ORANGE (PKMO) 活细胞线粒体荧光探针

 

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
PKmito ORANGE (PKMO) 活细胞线粒体荧光探针	MX4325-5nmol	5nmol	1680
	MX4325-25nmol	25nmol	6580

产品描述

PKmito ORANGE (PKMO)是北京大学陈知行课题组研发的PKmitoTM系列染料中的成员之一，兼具明亮的荧光、非常低的化学毒性和光学毒性，以及优秀的线粒体定位能力的特征。

PKmito ORANGE (PKMO)高特异性标记活细胞的线粒体。由于胞内分子三线态淬灭剂COT基团的存在，赋予该探针极其低的光学毒性，从而使其适合用于线粒体的长时间示踪。PKMO聚集在线粒体内膜（IM），特别适合通过STED超分辨光学显微镜（775nm损耗激光）对线粒体嵴结构和动力学进行成像观察。PKMO的最大吸收和发射波长分别是：591nm和608nm，能用于宽场、共聚焦、SIM或STED显微镜。

PKmito ORANGE (PKMO)的重要特征：

j Ab：591nm；Em：608nm；

k 适用于活细胞线粒体的长期成像；

l 不适合用于固定细胞的线粒体染色；

m 兼容于宽场、共聚焦、SIM或STED显微镜。

产品特性

外观：固体	溶解性：溶于DMSO
荧光半衰期（细胞）：1.8ns	STED损耗波长：775nm
最大吸收波长λabs：591nm（MeOH）	最大发射波长λfl：608nm（MeOH）
荧光光谱：

 

保存与运输方法

保存：≤-20°C避光干燥保存，收到货至少12个月有效。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 本品量非常少，使用前低速离心后直接加适当溶剂溶解使用，切勿分装称量。

2） 整个染色过程中需注意避光。

3） PKmitoTM产品的商标持有者是Genvivo Biotech Co., Ltd.

4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 储存液的配制

j 初次使用，请将低温保存的PKMO（固体）置于室温回温至少20min，低速离心3~5min。

k 于超净台内开盖，直接往管内加入适量高质量的无水DMSO使其溶解，配制成250µM（1000×）母液。本染料可以反复冻融，因此，不建议分装。每次使用完毕后，请将1000×母液置于≤-20°C 以下避光冻存。但务必要注意，每次开盖取样前，不管是固体还是母液，都必须让其恢复到室温。在正确的溶解和储存和使用习惯下，母液至少能稳定保存3个月。

a）MX4325-5nmol：往管内加入20µl无水DMSO，使其溶解且充分混匀，得到250µM（1000×）母液；

b）MX4325-25nmol：往管内加入100µl无水DMSO，使其溶解且充分混匀，得到250µM（1000×）母液；

2. 染色工作液的配制

于实验前，用37℃预热的常用细胞培养基（比如：DMEM+10% FBS）将适量的250µM母液稀释到250nM（1×）工作液，简单涡旋或用枪吹匀后备用。染色工作液必须新鲜配制，久置后可能导致部分染料降解或沉淀。染色工作液不可重复使用。

3. 细胞准备和染色

j 按常规方法，在爬片上、玻底培养皿或玻底多孔板中接种和培养细胞。

k 当细胞生长到所需密度，用新鲜配制的染色工作液替换旧的培养基，确保染色工作液覆盖所有的细胞。l 于37℃、5% CO2的培养箱中避光孵育15~30min。

m 用37℃预热的培养基清洗细胞1~2次，之后更换成不含探针的培养基，即可用于荧光成像。

4. 细胞成像

PKMO染色后的细胞，用580~590nm激发，收集600~700nm范围内的荧光。也可以根据具体的实验（比如：多重染色）来设置检测条件。

染色示例（来自文献，仅做参考）

 

Fig.PKMO enables long time-lapse nanoscopic recordings of mitochondrial cristae in COS-7 cells with minimal phototoxicity. A. 2D-STED recording of mitochondrial cristae of a COS-7 cell labeled with PKMO. (Scale bar, 10 μm.) B. Magnified images of the white boxed areas (i, ii) in A. C. Fluorescence intensity line profiles measured as indicated in the magnified view of white boxed area in B. D. Time-lapse recordings of live COS-7 cell labeled with PKMO and PKMO 0.9; PKMO maintained both fluorescent signal and mitochondrial morphology during 30 frames of STED recording, while PKMO 0.9 caused visible mitochondrial swelling after 10 frames. E. Time-lapse STED nanoscopy recordings highlighting mitochondrial tubulation. (Scale bar, 1 μm.) F. Time-lapse STED nanoscopy recordings showing mitochondrial network dynamics such as fusion and fission. (Scale bar, 1 μm.) All the image data were deconvoluted and image series were corrected for photobleaching.

参考文献

[1]Yang, Zhongtian, et al. “Cyclooctatetraene-conjugated cyanine mitochondrial probes minimize phototoxicity in fluorescence and nanoscopic imaging.” Chemical science 11.32 (2020): 8506-8516.

[2] Liu Tianyan et al.“Multi-color live-cell STED nanoscopy of mitochondria with a gentle inner membrane stain”PNAS (2022):119 (52).

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归集麒生物/MKBio懋康所有】