GV3101(pSoup-p19) Electrocompetent Cell
农杆菌电转感受态细胞
产品订购：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| MF2470-0500UL | GV3101(pSoup-p19) Electrocompetent Cell电转感受态细胞 | 10×50μl | 650 |
| MF2470-2500UL | GV3101(pSoup-p19) Electrocompetent Cell电转感受态细胞 | 50×50μl | 2600 |
【好消息】：见我司懋康生物整理的根癌（发根）农杆菌感受态细胞技术专题。
菌株描述
GV3101菌株的背景为C58型，核基因含利福平抗性基因rif。为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90（pTiC58DT-DNA），此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90（pTiC58DT-DNA）质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。pMP90（pTiC58DT-DNA）型Ti质粒携带筛选标签Gent，赋予GV3101菌株庆大霉素抗性。在GV3101菌株中转入help质粒：pSoup-p19，即得到GV3101(pSoup-p19)菌株，可协助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌内复制，同时赋予该菌株四环素（Tet）抗性。另外，来源于番茄丛矮病毒的p19蛋白，能抑制宿主对外源基因的RNA沉默效应，提高异源基因转录子的稳定性，进而改善异源蛋白的表达。本菌株适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。
我司（懋康生物）提供的GV3101(pSoup-p19) 电转感受态细胞经特殊工艺制作，特别适合大质粒的转化。
基因型为C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gentR) Nopaline (pSoup-p19-tetR)，经pGs2质粒（卡那霉素抗性）检测转化效率>105cfu/μg DNA。
产品包装
| 组分编号 | 组分名称 | 货号（规格） | |
| MF2470-0500UL | MF2470-2500UL | ||
| MF2470-A | GV3101(pSoup-p19) Electrocompetent Cell | 10×50μl | 50×50μl |
| MF2470-B | pGs2 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
保存与运输方法
保存：-80℃保存，1年有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2） 整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3） 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
4） 为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
5） 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。
6） 平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。
7） 利福平浓度应≤25μg/ml，过高浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。
8） GV3101(pSoup-p19)感受态细胞虽具有四环素抗性，但在转入目标质粒涂板筛选阳性克隆时，只需加入目标质粒抗性的抗生素，不用加四环素。
9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。
2) 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞插入冰中5min，待其融化，加入1~5μg（体积不大于6μl）质粒DNA，用手拨打管底使其混匀，立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用【注意：质粒DNA最好用试剂盒抽提，且用双蒸水溶解。由于感受态转化效率较高，第一次使用最好做预试验确定最佳的质粒用量】。
3) 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作），将电击杯从冰中取出，吸水纸吸干外表面水分，快速放入电转槽中，启动电击，电击完成快速插入冰中。
4) 加入700μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，于28℃振荡培养2~3h。
5) 6,000rpm离心1min，留取 100ul左右上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。
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附表1 固体和液体LB培养基配方
| 组分Component | LB（液体）/升 | LB（固体）/升 |
| 胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
| 酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
| 氯化钠NaCl | 10g | 10g |
| 1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
| 琼脂Agar | / | 15g |
附表2 固体和液体YEB培养基配方
| 组分Component | YEB（液体）/升 | YEB（固体）/升 |
| 胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
| 酵母提取物Yeast extract | 1g | 1g |
| 牛肉浸膏Beef Extract | 5g | 5g |
| 蔗糖Sucrose | 5g | 5g |
| 七水硫酸镁MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
| 1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
| 琼脂Agar | / | 15g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集麒生物/MKBio懋康所有】
