描述
DH5α λpir Chemically Competent Cell
大肠杆菌化学感受态细胞
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货号 |
产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| MF2494-1000UL | DH5α λpir Chemically Competent Cell化学感受态细胞 | 10×100μl |
356 |
| MF2494-5000UL | DH5α λpir Chemically Competent Cell化学感受态细胞 | 50×100μl |
1356 |
菌株描述
DH5α λpir菌株来源于DH5α，在DH5α菌株的基因组中引入λpir，使得菌株可以表达PIR蛋白，让含R6Kg ori复制子的质粒得以正常复制。DH5α λpir菌株缺失核酸内切酶 （endA1），提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 （recA1）减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性。lacZΔM15的存在使DH5α λpir可用于蓝、白斑筛选。
DH5α λpir菌株基因型：
F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1
phoA
产品描述
本品是大肠杆菌DH5α λpir菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
产品包装
| 组分编号 | 组分名称 | 货号（规格） | |
| MF2494-1000UL | MF2494-5000UL | ||
| MF2494-A | DH5α λpir Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
| MF2494-B | Control Vector puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
保存与运输条件
保存：-80℃保存，六个月有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。
2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
6） DH5α λpir菌株生长缓慢，在平板上培养或液体摇菌时都要延长菌体生长时间（37℃，18h以上）。
7） 后续进行阳性菌落的扩繁和高纯质粒的获取，推荐选用TB培养基（Terrific Broth），优于LB或SOC。
8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。
2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养70min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜（至少18h）。
【注意】：
a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。原则是以在平板上能挑到单克隆菌落为宜。
b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集麒生物/MKBio懋康所有】