组织消化（Tissue Dissociation）专题 — —原代细胞/肿瘤细胞制备
搜索关键词：
组织消化 Tissue dissociation；原代细胞；肿瘤细胞；细胞外基质；消化酶；胶原酶；中性蛋白酶；透明质酸酶；木瓜蛋白酶；DNase I；胰酶；胰酶抑制剂；
基本描述：
细胞原代培养具有广泛的生理意义，不仅可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段，还可服务于临床实践，用于药物筛选等前期研究。所谓原代培养就是将动物机体的各种组织，使用各种酶（比如胰蛋白酶、胶原酶）、螯合剂（如EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，并置于合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，并保持原有的基本性质的过程。通常将第一代至第十代以内的细胞培养过程称为原代培养。
原代培养最关键的一步便是获得需要的原代细胞，并维持其最佳的细胞活力，以提高成功培养和后期研究的几率。原代细胞制备最常用的方法即是酶解法，根据组织类型和对应的组织构造，常用以下一种或者多种酶组合的方法来达到水解目的。
1. 胶原酶 Collagenase
作为一种蛋白水解酶，常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶，胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列（高频出现在胶原collagen，很少在其他蛋白中发现）并切割氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。不同于其他蛋白酶，胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维，这种胶原纤维广泛存在结缔组织。
我司（MKbio，懋康生物）提供的胶原酶来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有梭菌蛋白酶A（Clostridiopeptidase A），能够降解天然胶原和网状纤维；还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别用以水解存在结蹄组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等。目前商业化的胶原酶因所含组分的差异，并结合科研团体的科研成果，应用上分类见下：
| 胶原酶类型 | 组分特征和应用 |
| I型胶原酶（Type 1） | 相对均量的多种酶活（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）；通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织的细胞制备。 |
| II型胶原酶（Type 2） | 含更高的梭菌蛋白酶活性；通常用作心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织的细胞制备。 |
| III型胶原酶（Type 3） | 含较低的蛋白水解活性；常用于乳腺细胞的制备； |
| IV型胶原酶（Type 4） | 含较低的胰酶活性；通常用于胰岛制备，和维持受体完整性比较重要的其他研究。也可用于髓系细胞制备。 |
| V型胶原酶（Type 5） | 部分纯化型，含更高的胶原酶和酪蛋白活性，更低胰酶水平以降低对膜蛋白和受体造成损伤。适用于胰岛制备。 |
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1001-100MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 1） | 100mg | 280 | 现货 |
| MX1001-500MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 1） | 5×100mg | 1260 | 现货 |
| MX1001-1000MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 1） | 10×100mg | 2200 | 现货 |
| MX1002-100MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 2） | 100mg | 280 | 现货 |
| MX1002-500MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 2） | 5×100mg | 1260 | 现货 |
| MX1002-1000MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 2） | 10×100mg | 2200 | 现货 |
| MX1003-100MG | Collagenase III 胶原酶III型（Type 3） | 100mg | 540 | 现货 |
| MX1003-1000MG | Collagenase III 胶原酶III型（Type 3） | 1g | 3300 | 现货 |
| MX1004-100MG | Collagenase IV 胶原酶IV型（Type 4） | 100mg | 280 | 现货 |
| MX1004-500MG | Collagenase IV 胶原酶IV型（Type 4） | 5×100mg | 1260 | 现货 |
| MX1004-1000MG | Collagenase IV 胶原酶IV型（Type 4） | 10×100mg | 2200 | 现货 |
| MX1005-100MG | Collagenase V 胶原酶V型（Type 5） | 100mg | 520 | 现货 |
| MX1005-1000MG | Collagenase V 胶原酶V型（Type 5） | 1g | 2800 | 现货 |
2. 中性蛋白酶Dispase II
中性蛋白酶（Neutral protease），商业名称dispase II，也称分散酶II。来源于Bacillus polymyxa，无支原体或其他动物病毒污染。一种非特异性金属蛋白酶，具比较温和的蛋白水解酶活性，对细胞损伤小且可维持细胞膜完整性，因此非常适合用于分离原代和继代细胞培养。研究显示Dispase II更能有效消化成纤维样细胞，相比较于上皮样细胞。Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1006-100MG | Dispase II 分散酶II（中性蛋白酶） | 100mg | 480 | 现货 |
| MX1006-1000MG | Dispase II 分散酶II（中性蛋白酶） | 1g | 1400 | 现货 |
| 04942078001 | Dispase II 分散酶II（中性蛋白酶） | 1g | 1800 | Roche原装，现货 |
3. 胰蛋白酶Trypsin
胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），来源于胰腺的一种丝氨酸蛋白酶，由223个氨基酸残基组成的单链多肽，底物特异性是带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链。胰酶主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端，当两者之一紧随为脯氨酸的情况除外。另外，当切割位点任一边紧邻酸性残基，胰酶水解速率也会减缓。
胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），以无活性的胰蛋白酶原（Trypsinogen）形式分泌于胰腺中，通过切割其末端六肽而得到活化，产生天然单链形式的β-胰酶（β-Trypsin），随后进行有限的自发裂解产生具水解活性的α-Trypsin（由二硫键共价连接的二条肽链组成）。胰酶水解活性可被多种化合物所抑制，有1）来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂；2）银离子；3）有机磷化合物，如氟磷酸异丙酯DFP；4）特定蛋白酶抑制剂，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、PMSF、TLCK等；
胰蛋白酶（胰酶，Trypsin）的应用如下：
1）组织消化，需要配合其他蛋白酶如胶原酶和弹性蛋白酶一起使用；2）胰酶消化以收集细胞；3）线粒体分离；4）体外蛋白研究；5）从塑料或者玻璃培养表面消化以去除单细胞层；6）多种血细胞凝集过程；7）流式DNA分析的样品制备；8）胰酶消化肽图谱；9）指纹和测序研究；10）环境监测；11）降低组织培养的细胞密度；12）细胞亚培养；13）融合蛋白切割；14）纯化糖蛋白内消化得到糖肽。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX2002-25G | Trypsin 1:250 (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250（粉末） | 25g | 135 | 现货 |
| MX2002-100G | Trypsin 1:250 (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250（粉末） | 100g | 360 | 现货 |
| MX2003-100ML | Trypsin (0.25%), Phenol Red 胰酶溶液（0.25%），含酚红 | 100ml | 110 | 现货 |
| MX2004-100ML | Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol Red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），含酚红 | 100ml | 120 | 现货 |
| 另，特别提供TPCK处理胰酶（TPCK可灭活胰酶混有的胰凝乳蛋白酶chymotryptic活性，得到更纯和更高特异性的胰酶）。我司提供两种级别的TPCK-胰酶，分别达到组织培养和蛋白测序级。 | ||||
| MX2005-100MG | Trypsin, TPCK Treated 胰蛋白酶（TPCK处理）（组织培养级） | 100mg | 1012 | 现货 |
| MX2006-100MG | Trypsin, TPCK Treated 胰蛋白酶（TPCK处理）（蛋白测序级） | 100mg | 1012 | 现货 |
| MX2006-500MG | 500mg | 现货 | ||
| Worthington
LS02120 |
Trypsin, Modified, Sequencing Grade（TPCK处理） | 4×25 ug | 299 | 原装进口，2周 |
| Worthington
LS02115 |
Trypsin, Purified, Sequencing Grade II（TPCK处理） | 4×25 ug | 1175 | 原装进口，2周 |
4. Elastase 弹性蛋白酶
弹性蛋白酶（Elastase），是另一种胰腺来源的丝氨酸蛋白酶，特异性识别并切割仅次于中性氨基酸的肽键。在所有蛋白酶中弹性蛋白酶非常独特，因其能水解天然弹力素。在血液和细菌内都有发现弹性蛋白酶。研究发现，弹性蛋白酶很适合用来消化肺脏以分离肺泡II型细胞。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1010-25MG | Elastase, from Porcine Pancreas 弹性蛋白酶（猪胰腺） | 25mg | 560 | 原装进口，2周 |
5. Hyaluronidase透明质酸酶
透明质酸酶（Hyaluronidase）是一类能够降低体内透明质酸活性的酶的总称，一种糖蛋白，能随机裂解透明质酸，软骨素和硫酸软骨素中的β-N-乙酰己糖胺-[1→4]糖苷键。常与粗制蛋白酶，如胶原酶Collagenase，联合使用于组织中分离活细胞。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1007-100MG | Hyaluronidase 透明质酸酶 | 100mg | 115 | 现货 |
| MX1007-1000MG | Hyaluronidase 透明质酸酶 | 1g | 860 | 现货 |
6. Papain 木瓜蛋白酶
木瓜蛋白酶Papain，一种半胱氨酸蛋白酶，具有广泛且特异的切割活性。相比较于胰腺蛋白酶如胰酶，弹性蛋白酶，能降解大多数的蛋白底物。常用来分离组织内的神经元材质。三阴乳腺癌研究常使用木瓜蛋白酶分离Fab片段加速PET扫描，以改善疾病治疗。
木瓜蛋白酶的应用如下：1）比其他蛋白酶更温和的细胞分离（比如皮层神经元，视网膜，和平滑肌）；2）蛋白结构研究，多肽图谱；3）红细胞表面修饰用于抗体筛选或鉴定；4）对IgG和IgM抗体处理以制备Fab；5）嵌入膜蛋白溶解；6）处理纯化的蛋白聚糖以生产糖肽；7）酶法伤口清创。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1008-25G | Papain, BC Grade 木瓜蛋白酶（试剂级） | 25g | 115 | 现货 |
| MX1008-100G | Papain, BC Grade 木瓜蛋白酶（试剂级） | 100g | 325 | 现货 |
7. DNase I 脱氧核糖核酸酶I
脱氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I，DNase I）常用在酶法细胞分离实验过程中，以降解消化体系内残留的核酸从而增加粘度和活力。DNaseI不会破坏细胞完整性。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MF0401-15KU | Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas
脱氧核糖核酸酶I，来源于牛胰腺 |
15KU | 380 | 原装进口，2周 |
8. Trypsin Inhibitor 胰酶抑制剂
胰酶抑制剂 Trypsin inhibitor，有多种来源。
本公司（MKbio）提供的为大豆源的胰酶抑制剂，能够失活胰酶活性，因此有时用于一些特定的细胞分离过程。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1009-1G | Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰酶抑制剂 | 1g | 719 | 现货 |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持”品质保障”的原则为广大客户提供优质产品。