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SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料

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SKU: MF0751-1ML 分类: 标签:

描述

SYBR Green I (10,000×in DMSO) 核酸凝胶染料

 

产品标签

GoldView;Acridine Orange 吖啶橙;GelRed;DuRed;GelGreen;溴化乙锭(EB);SYBR Green I;

产品信息

产品名称                                                                  

产品编号             规格             价格(元)      促销价(元)

SYBR Green I (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料

MF0751-100UL 100µl 780 650
SYBR Green I (10,000× in DMSO )核酸凝胶染料 MF0751-500UL 500µl 2950 2655
SYBR Green I (10,000× in DMSO )核酸凝胶染料 MF0751-1ML 1ml 4750 4250

产品描述

SYBR Green I,是目前检测琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA最灵敏的染料之一,最低检出限为20pg DNA(254nm紫外发射光),60pg DNA(300nm透射光);还可用于寡核苷酸检测(1-2ng,300nm透射光),比溴化乙锭EB的灵敏度高50-100倍。

SYBR Green I检测凝胶中核酸的非凡灵敏度归因其独特的染料特性:①SYBR Green I具有超强的DNA结合力,与DNA结合后荧光显著增强—至少比EB高出一个数量级;②DNA/SYBR Green I复合物的荧光量子产率(~0.8)比DNA/EB(~0.15)高5倍多;③SYBR Green I在琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中迅速渗透,在缺乏DNA时背景荧光可忽略,让染色步骤快速,且成像之前无需脱色。

SYBR Green I因与DNA结合能力强,既能在电泳前(预染),也能在电泳后(后染)对DNA进行染色。还可对毛细管电泳分离的DNA进行染色。SYBR Green I与DNA的结合不会抑制多种常见的限制性内切酶活性,包括Hind III和EcoR I,可直接进行消化或连接。用于琼脂糖凝胶电泳检测DNA后,还可直接将DNA转移到膜上,进行后续的核酸印迹杂交分析。

本品为溶于DMSO的10,000×的SYBR Green I核酸染料,电泳级。

保存与运输方法

保存:-20°C避光干燥保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1. 独立实验室进行的艾姆斯试验表明SYBR Green I的致突变性明显比EB要低很多。但是,必须警告用户注意,目前尚无关于SYBR Green I对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合,应当被看作潜在诱变剂,使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心,因DMSO能促进有机分子进入组织。染料的废弃处理应当符合当地的规定。

2. SYBR Green I对dsDNA的检测灵敏度非常高(20pg,254nm紫外发射光),但对ssDNA和RNA的灵敏度稍低(100-300pg,254nm紫外发射光),使之成为复杂溶液中检测dsDNA的理想选择。尤其是复杂溶液中的ssDNA和RNA可能会掩盖结果的时候,如凋亡特有的连续梯度条带apoptosis ladders。

3. SYBR Green I的最大激发波长为497nm,但在~290nm和~380nm处有二级激发峰。与DNA结合的SYBR Green I的荧光发射集中在520nm。这些光谱特性让SYBR Green I适用于多种凝胶检测仪,从紫外反射(上紫外)和透射仪(下紫外)到氩离子激光器和水银灯激发的凝胶扫描仪。

4. 预染色方法,电泳时间不要超过2h,否则SYBR Green I会从DNA上脱离出来,产生弥散状条带。

5. 紫外照射透视下,与dsDNA结合的SYBR Green I呈绿色荧光。如果胶中含ssDNA,则荧光颜色为橘黄色而不是绿色。

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、使用前准备工作

使用前将本品取出并回温至室温,使DMSO彻底解冻、溶液均一。于离心机上短暂离心确保所有溶液到管底。第一次使用时可将本品分装成多个小份后冻存,小份染料能更快溶解。

二、染色方法

1.电泳后的DNA染色(后染)

1)在琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。

【注】:TBE和TAE缓冲液均适合于SYBR Green I染色。

2)用TE、TAE或TBE缓冲液将SYBR Green I储存液进行1:10,000倍稀释。

【注】:

①SYBR Green I染色对pH敏感,为获得最佳的灵敏度,应确认在染色温度下染色液的pH值在7.5- 8.0之间(pH8.0更佳)。

②用水配制的染色液不如用缓冲液配制的稳定,为确保最大的染色灵敏度,必须在24h内使用。此外,用pH低于7.5或高于8.0的缓冲液配制的染色液也不太稳定,染色效率有所下降。

3)染液要充分覆盖凝胶,室温轻摇孵育10-40min。

【注】:

①推荐用塑料而不是玻璃容器来储存染色液,因染料会吸附到玻璃表面。

②染色过程避光进行,建议在容器上加盖铝箔或置于暗处。

③凝胶厚度及琼脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同,染色时间将有所不同。

④无需脱色。

⑤染色液可置暗处(最好是冷藏)放置1周或更久,重复使用最多4次。

2.电泳前的DNA染色(预染)

1)配制成SYBR Green I预制凝胶

临灌胶前将SYBR Green I储存液按照1:10,000倍稀释到凝胶溶液中,预制成含有SYBR Green I染料的琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶。电泳结束后即可在适合的凝胶成像仪下检测。【预染推荐用此法】

预制的SYBR Green I凝胶的DNA检测下限(大约为30-40pg/条带),可能略高于电泳后染色(<20pg/条带)。此外,在SYBR Green I凝胶中的DNA片段迁移率明显比无染料凝胶中的相同片段慢。

2)作为DNA模板预染标记

一般而言,DNA在电泳前与染料工作液(1:10,000倍稀释)至少孵育15min。

三、凝胶成像(紫外或蓝光透射仪或紫外顶置光源直射)

可在紫外或蓝光光源下轻松观察到用SYBR Green I染色的DNA。

四、从dsDNA中去除SYBR Green I

使用简单的乙醇沉淀能从dsDNA中去除99%以上的SYBR Green I染料。

将SYBR Green I染色的DNA移至100mM NaCl,加入2.5倍体积的无水或95%的乙醇。在冰上孵育约20min,4℃离心至少10min。去除乙醇,并用70%乙醇洗涤沉淀。让乙醇挥发,并用TE重悬双链DNA。

 

 — — Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】

其他信息

重量 50 克
品牌:

懋康MKBio

CAS:

N/A

规格:

1ml

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