NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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描述

NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

 

 

产品标签:

NovaBlue(DE3);OverExpress C43(DE3);BL21 (DE3);表达感受态细胞;pET表达载体;

 

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货号 产品名称 规格 价格(元)
MF2491-1000UL NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl 396
MF2491-5000UL NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1696

 

菌株描述

NovaBlue(DE3)菌株来源于K12菌株,具有极高的转化效率,能同时用于普通质粒的构建以及蛋白的原核表达。NovaBlue(DE3)菌株具四环素抗性,recA和endA的突变有利于插入DNA的稳定和高纯质粒DNA的提取。lacZΔM15的存在使其能用于蓝白斑筛选。

NovaBlue(DE3)菌株含DE3区,说明其染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白表达。

 NovaBlue(DE3)菌株基因型:F`[ proA+B+ lacIq ZΔM15::Tn10 (TetR)] endA1 hsdR17(rk12-,mk12+) supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac(DE3)

 

产品描述

本品是大肠杆菌NovaBlue(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

产品包装

组分编号 组分名 货号(规格)
MF2491-1000UL MF2491-5000UL
MF2491-A NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2491-B Control Plasmid puC19,10pg/μl 10μl 10μl

 

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

 

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。

2) 感受态细胞最好在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

 4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

 7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。

8) 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

 3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

 

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

 

附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2)37℃,200rpm摇菌培养过液。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。

4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。

5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

6)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

7)37℃,120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

8)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

9)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

 

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。

 

          — —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】

 

其他信息

重量 50 克
品牌:

懋康MKBio

CAS:

N/A

规格:

50×100μl

货期:

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