JC-10 for Mitochondrial Membrane Potential 线粒体膜电位荧光探针

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描述

JC-10(JC-1优越替代物)线粒体膜电位荧光探针

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产品标签

JC-10;JC-1;Rhodamine 123 罗丹明123; CCCP;Mitochondrial Membrane Potential 线粒体膜电位探针;CAS:47729-63-5

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产品名称 产品编号 规格 价格(元)
JC-10 for Mitochondrial Membrane Potential 线粒体膜电位荧光探针 MX3206-1MG 1mg 648
JC-10 for Mitochondrial Membrane Potential 线粒体膜电位荧光探针 MX3206-5MG 5mg 1958
JC-10 for Mitochondrial Membrane Potential 线粒体膜电位荧光探针 MX3206-25MG 25mg 7858

产品描述

JC-10是一种新型的用来监测线粒体膜电位变化的荧光探针,是JC-1的优越替代物。与JC-1相比,具有以下几个重要优势:1)溶解性得以改良——在水溶液中形成沉淀可能性明显降低;2)使用更方便——简化步骤将手动操作时间最小化;3)荧光信号更高——改良的信号与背景荧光的信噪比;4)结果更稳定——优化探针以保证更连续性和稳定性结果。

JC-10是一种替换JC-1,用于检测线粒体膜电位△Ψm的理想荧光探针。JC-10以电势依赖性的方式积聚在线粒体内,可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内,JC-10聚集在线粒体基质中形成聚合物,聚合物发出强烈的红色荧光(Ex=540 nm, Em=590 nm);不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失,JC-10只能以单体的形式存在于胞浆中,产生绿色荧光(Ex=490 nm, Em=525 nm)。JC-10不仅可用于定性检测,因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测,因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时,只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

JC-10可用来检测大量细胞类型如神经元和心肌细胞的线粒体膜电位,也可用来研究重要的细胞生理活动,比如ATP合成,活性氧(ROS)和凋亡发生等。

本品以粉末形式提供,只需溶于DMSO配制成2mg/ml的储存液,然后用合适的缓冲液稀释到工作浓度即可使用。

产品特性

1)同义名:Enhanced JC-1;

2)分子量:~600 g/mol

3) 纯度:>95%(HPLC)

4) 溶解性:DMSO(2mg/ml)

保存与运输方法

保存:-20℃避光保存,至少1年有效。

运输:室温运输。

注意事项

  1. JC-10是光敏感性的,所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。
  2. JC-10染色完成后,立即进行后续的结果分析非常必要;
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 染色工作液制备

JC-10储存液制备:取本品溶于无水DMSO配制成2mg/ml储存液(比如5mg JC-10加入2.5ml DMSO),混匀后,按照单次用量分装,避光冻存,避免反复冻融。

JC-10(1×)工作液制备:取一管JC-10储存液置于室温,使其充分融化,之后用HHBS(1×Hanks with 20 mM Hepes buffer, pH 7.0)或其他缓冲液(pH 7-8,含0.02% Pluronic®F-127)配制成10-30μM的1×工作液,漩涡混匀待用。

【注意】:对于某些细胞系pH8的工作液可能防止JC-10泄露。

2. JC-10染色步骤(荧光酶标仪)

1)用待测药物处理细胞一段时间(比如,Jurkat细胞用喜树碱camptothecin)处理4-6h)以诱导凋亡。对于空白孔(不含细胞的培养基)加入相应体积的药物缓冲液。

2)按照100μl/孔/96孔板或25μl/孔/384孔板的量加入JC-10工作液到培养孔内。

3)将整个培养板置于37℃,5% CO2孵育15-60min。【注意】:合适的孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次试验建议优化孵育时间。

4)用荧光酶标仪监测Ex/Em = 500/525 nm(FITC通道)和540/595 nm(TRITC通道)的荧光变化,计算两者荧光信号比值,以判断细胞健康程度。

【可选】:吸掉JC-10染色工作液,按照100μl/孔/96孔板或25μl/孔/384孔板的量加入HHBS缓冲液或其他生理缓冲液,然后再进行荧光信号分析。

3. JC-10染色步骤(荧光显微镜或流式细胞仪)

1)用待测药物处理细胞一段时间(比如,Jurkat细胞用喜树碱camptothecin)处理4-6h)以诱导凋亡。对于空白孔(不含细胞的培养基)加入相应体积的药物缓冲液。

2)离心去上清,调整细胞密度为1-5×105细胞/管。

3)用500µl JC-10染色工作液重悬细胞。

4)室温孵育或37℃,5%CO2孵育10-30 min,避光。【注意】:合适的孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次试验建议优化孵育时间。

5)用荧光显微镜分别观察Ex/Em = 490/525 nm(FITC通道)和540/595 nm(TRITC通道)的荧光变化;或者用流式细胞仪(FL1和FL2通道进行检测)。

【可选】:离心后吸掉JC-10染色工作液,加入500µl HHBS缓冲液或其他合适缓冲液重悬细胞使其密度为1-5×105细胞/管,然后再进行荧光分析。

应用示例(荧光显微镜观察):

文献来源:Yokokura S et al. Calmodulin antagonists induce cell cycle arrest and apoptosis in vitro and inhibit tumor growth in vivo in human multiple myeloma. BMC Cancer. 2014 Nov 26;14:882.

实验方法(线粒体膜电位去极化检测):A total of 1 × 106cells were loaded with 10 μg/ml of JC-10 at 37°C for 30 min. Next, the cells were treated with 60 μM of CaM antagonists at 37°C for 1 h and the visualized using a fluorescence microscope (Olympus BX-51/DP-72; Olympus, Tokyo, Japan) fitted with a WIB filter (excitation, 460–490 nm; dichroic mirror, 505 nm; emission barrier filter, 510 nm).

实验结果(线粒体膜电位去极化检测):

Fig 1. Effects of CaM antagonists on intracellular Ca2+levels and mitochondrial membrane potential. Cells were pretreated with JC-10 dye for 30 min, and subsequently incubated with CaM antagonists (60 μM) for 1 h. The cells were then visualized under a fluorescence microscope to visualize the yellow fluorescent aggregation that indicates high mitochondrial membrane potential which is distinct from the green fluorescent monomer observed at a low mitochondrial membrane potential.

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货号 名称 规格
MX3202-200UL JC-1 (5 mg/ml in DMSO)线粒体膜电位荧光探针 200μl
MX3204-100T JC-1线粒体膜电位检测试剂盒 100T
MX3206-1MG JC-10 for Mitochondrial Membrane Potential线粒体膜电位荧光探针 1mg
MX3207-100T JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 100T
MX3258-100UL CCCP (50 mM)凋亡诱导剂/质子载体 100μl
MX3259-100UL FCCP (50 mM)凋亡诱导剂/质子载体 100μl
MX3253-100MG Camptothecin喜树碱 100mg
MS4301-1G Pluronic®F-127, Cell Culture Tested细胞培养级 1g
MS3510-500ML 1× HHBS (Hanks’ Balanced Salt Solution with 20mM HEPES) , pH 7.2-7.4 500ml

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】

其他信息

重量 50 克
品牌:

懋康MKBio

CAS:

N/A

规格:

5mg

货期:

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