Hoechst 33342/PI Double Stain Kit 凋亡/坏死双染试剂盒

¥462.00

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SKU: MX3201-100T 分类: 标签:

描述

Hoechst 33342/PI Double Stain Kit细胞凋亡双染试剂盒

产品标签

Hoechst 33342/PI凋亡检测试剂盒,JC-1膜电位检测;Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒;TUNEL细胞凋亡检测试剂盒;

 

产品信息

   产品名称

产品编号

  规格

      价格(元)

   Hoechst 33342/PI Double Stain Kit细胞凋亡双染试剂盒

 MX3201-100T

   100T  

462

 

产品描述

Hoechst 33342/PI细胞凋亡双染试剂盒(Hoechst 33342/PI Double Stain Kit)是一种采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)双染进行细胞凋亡与坏死分析的检测试剂盒。检测原理在于:Hoechst 33342是一种活细胞核染料,能穿透正常细胞以及凋亡细胞膜,与DNA结合(最大激发波长为350nm,发射波长为461nm),呈现蓝色荧光。当细胞发生凋亡,染色质发生固缩,染色后的细胞荧光比正常细胞明显增强。而PI是一种死细胞核染料,不能穿透细胞膜,对于具完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。但对于坏死细胞,由于膜的完整性丧失,PI能够穿透进入细胞,与DNA结合(最大激发波长为536nm,发射波长为617nm),呈现红色荧光。经Hoechst 33342/PI双染后,使用流式细胞仪或荧光显微镜检测,正常细胞为弱红色荧光+弱蓝色荧光;凋亡细胞为弱红色荧光+强蓝色荧光;坏死细胞为强红色荧光+弱蓝色荧光。

本试剂盒可检测100个样品,每个样本的细胞数量可为0.1~1×06。

 

产品包装

编号

组分名称

规格

保存方法

MX3201-A     

   Cell Stain Buffer 细胞染色缓冲液(2×)    

     100ml    

   4℃或-20℃  

MX3201-B

Hoechst 33342 StainHoechst染色液

0.5ml

-20℃避光

MX3201-C

PI Stain PI染色液

0.5ml

-20℃避光

 

保存与运输方法

保存:-20℃保存,1年有效。使用频繁可置4℃保存,5个月有效。Hoechst染色液和PI染色液需避光保存。

运输:冰袋运输。

 

注意事项

1) 荧光染料均存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。

2) Hoechst 33342孵育细胞时间不宜过长,一般控制在20min内。太长容易引起探针的发射光谱由蓝光向红光迁移,导致红色荧光与蓝色荧光的比例改变。

3) PI对人体有一定的刺激性,请注意适当防护。

4) 如果要进行组织的凋亡和坏死检测,请将组织消化制备成单细胞悬液后再检测。

5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存与运输方法

保存:-20℃干燥保存,2年有效。 

运输:室温运输。

 

注意事项

1)本品不是临床药物,只能用于科研用途,不能用于诊断或临床用途。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

一、细胞样本制备

1.1贴壁细胞

1.1.1 小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用;

1.1.2 用胰蛋白酶消化细胞至细胞可以轻轻用移液枪或枪头吹打下来,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有贴壁细胞,并轻轻吹散细胞

1.1.3 收集上述细胞悬液到离心管内,4℃,1000g离心3~5min,使细胞沉至管底,小心吸取上清并丢弃,可留约50μl培养液,以免吸走细胞。【注意】:某些特殊细胞,如果沉淀不充分,可以适当提高离心力或者延长离心时间。

1.1.4 加入约1ml提前预冷的PBS,重悬细胞,并转移到1.5ml无菌离心管,4℃,1000g离心3~5min,使细胞沉至管底。

1.1.5 小心吸取上清并丢弃,可留约50μl PBS,以免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。

1.2 悬浮细胞

1.2.1 4℃,1000g离心3~5min,使细胞沉至管底,小心吸取上清并丢弃,可留约50μl培养液,以免吸走细胞。

1.2.2 加入约1ml提前预冷的PBS,重悬细胞,并转移到1.5ml无菌离心管,4℃,1000g离心3~5min,使细胞沉至管底。

1.2.3 小心吸取上清并丢弃,可留约50μl PBS,以免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。

二、染色前制备

2.1细胞染色缓冲液(1×)的准备:取适量细胞染色缓冲液(2×)与无菌去离子水或蒸馏水等比例混合,即为细胞染色缓冲液(1×),4℃保存备用。

2.2 细胞重悬:将上述收集好的0.1~1×06细胞,加入0.9ml细胞染色缓冲液(1×),重悬细胞沉淀。

三、Hoechst 33342/PI双染

3.1加入5μl Hoechst 33342染色液,置于37℃水浴,孵育5~15min。

3.2置于冰水冷却,4℃,1000g离心3~5min,使细胞沉至管底,弃上层染色液。

3.3加入0.9ml细胞染色缓冲液(1×),重悬细胞沉淀。

3.4加入5μl PI染色液,置于冰浴或4℃,孵育20~30min。

【注意】:也可一步法进行染色:加入5μl Hoechst 33342染色液和5μl PI染色液,轻轻混匀,置于冰浴或4℃,孵育20~30min。

四、结果分析

4.1流式细胞仪检测

用流式细胞仪在激发波长400~500nm处检测蓝色荧光,在>630nm处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

4.2荧光显微镜检测

检测前,4℃,1000g离心3~5min沉淀细胞,用PBS洗涤一次,再涂片观察红色和蓝色荧光。

【注意】:对于贴壁细胞,也可不收集细胞,弃培养液后直接依次按照上述比例加入细胞染色缓冲液(1×)、Hoechst 33342染色液、PI染色液,置于冰浴或4℃,孵育20~30min。染色后,PBS洗涤一次,再在荧光显微镜下观察。

4.3 结果呈现

正常细胞呈低蓝光/低红光,凋亡细胞呈高蓝光/低红光;坏死细胞呈低蓝光/高红光。

 

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】

 

其他信息

重量 50 克
品牌:

懋康MKBio

CAS:

N/A

规格:

100T

货期:

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