GUS Histochemical Stain Kit GUS染色试剂盒(组织化学法)

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描述

GUS Histochemical Stain Kit GUS染色试剂盒(组织化学法)

— — 转基因植物GUS表达活性定性研究

 

关键词:

β-glucuronidase (GUS) β-葡(萄)糖苷酸酶;X-Gluc;GUS活性检测;Histochemical 组织化学定位法;MUG;农杆菌介导的转基因植物研究;

 

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 GUS Histochemical Stain Kit GUS染色试剂盒(组织化学法)  MM1001-1KIT  1kit (50ml)  595  现货

 

基本描述:

GUS,英文名β-glucuronidase,中文名β-葡(萄)糖苷酸酶,一种功能非常全面的报告基因检测系统,广泛用于植物分子生物学和微生物学研究。GUS基因融合系统,根据底物的类型,对细胞/组织或蛋白提取液的GUS酶活性进行定性或定量分析。组织化学方法(定性研究)用于GUS融合蛋白表达的亚细胞定位,多以X-Gluc为底物,因其能被水解生成一无色的葡萄糖醛酸和一肉眼可见的氯-溴靛蓝(chloro-bromoindigo)深蓝色沉淀。荧光分析法(定量研究)则用于GUS融合蛋白表达水平的研究,常以MUG为底物,因其能被水解生成一无色的葡萄糖醛酸和一荧光产物4-MU(4-甲基伞型酮),蓝色荧光(Ex= 365nm,Em= 445nm)。

由于绝大多数植物细胞内不存在内源性的GUS活性,因此,GUS广泛用作转基因植物的报告基因,特别是外源基因瞬时表达的转化实验。

 

产品特点:

本试剂盒以X-Gluc为显色底物,用于GUS融合蛋白的组织化学染色(定性研究)。另,该试剂盒含染色所需的所有试剂,只需将X-Gluc溶液和GUS染色缓冲液按比例混合即可制备成GUS染色工作液。该试剂盒可制备50ml染色工作液。具有操作简单、快速,稳定,且低背景的优点。

 

产品组分:

组分编号           组分名称                                         规格                  储存方法
MM1001-A X-Gluc Substrate 1Vial -20℃避光干燥保存
MM1001-B X-Gluc Solvent 底物溶解液 1Vial 室温保存
MM1001-C GUS Stain Buffer GUS染色缓冲液 50ml 2-8℃保存

 

产品使用:

一、X-Gluc(50×)溶液的配制

1)于实验前提前将X-Gluc Substrate(组分A)、GUS Stain Buffer(组分C)置于室温回温至少20min;

2)低速离心组分A,X-Gluc Solvent(组分B)。然后将所有的组分B加入组分A,低速漩涡至粉末完全溶解,即配制X-Gluc(50×)溶液,根据单次用量,-20℃避光保存。

【注意】:正常X-Gluc(50×)溶液呈无色,若溶液变为红色或棕色,说明其失效。

二、GUS染色工作液的配制

按照以下比例,混合制备GUS染色工作液。建议现配现用。

组分                          GUS染色工作液配制总量(ml)          
1ml    5ml 10ml
X-Gluc(50×)溶液 20μl 100μl 200μl
GUS染色缓冲液 1ml 5ml 10ml

三、GUS染色步骤

1)取材:将根茎、叶片、花瓣等组织剪成小片,放到1.5ml离心管;

【注意】:染色用植物材料的制备方法根据特定组织和器官类型而有差异。对于拟南芥的根/花/叶片,以及烟草幼苗的根,可以不做任何预处理直接进行染色;但是,对于烟草和马铃薯的茎和叶片需要先剪切成薄片(~1-3mm)再进行染色。而,更大的组织样品,需用真空渗透法来促进染色工作液渗入细胞。

2)染色:加入适量体积现配好的染色工作液,以完全覆盖材料为准。铝箔纸包好,室温孵育3h-过夜。同时设置阴性和阳性对照实验;

3)脱色:将染色好的材料转入70%酒精中脱色2-3次,直至阴性对照材料变为白色。GUS染色阳性的蓝色斑点非常稳定,不会被酒精脱色。

4)观察:大部分GUS染色阳性的蓝色斑点肉眼能观察到,然而,有些材料可能蓝色斑点很细微,需要显微镜下才能观察到。【注意】:白色背景上的蓝色斑点即为GUS表达位点。

 

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产品名称                                                             产品编号              规格             价格(元)    货期           
X-Gluc 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡糖苷酸环己胺盐 MF2004-100MG 100mg 350 现货
MUG 4-甲基伞型酮-beta-D-葡糖苷酸 MF2005-250MG 250mg 580 1-2周

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】

 

其他信息

重量 50 g
品牌:

懋康MKBio

CAS:

N/A

规格:

1kit (50ml)

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