Filipin III (Cholesterol fluorescent probe) 胆固醇荧光探针

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描述

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)

胆固醇荧光探针

 

产品关键词

Filipin III 菲律宾菌素 III;Cholesterol fluorescent probe 胆固醇荧光探针;U 18666A;polyene antibiotic 多烯抗生素;CAS NO:480-49-9;

产品信息

产品名称

产品编号 规格         价格(元)

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针

MX5213-500UG 500µg 1943
Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针 MX5213-1MG 1mg

2733

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针 MX5213-5MG 5mg

9963

产品描述

菲律宾菌素 III(Filipin III)是一种五烯大环内酯抗生素,是分离自菲律宾链霉菌(S. filipinensis)培养物的四种多烯大环内酯异构体中的占比最多的一种。归因其发荧光且特异性结合胆固醇的特性,菲律宾菌素 III常常通过冷冻断裂电镜术和结合后降低的荧光来检测膜上的胆固醇。菲律宾菌素 III用在番茄细胞中,观察激活配体非依赖性的信号反应。通过菲律宾菌素 III和胆固醇的螯合活性,破坏正常和转染角质细胞的脂筏,抑制AKT信号通络。菲律宾菌素 III复合物最大激发波长是338和357nm,最大发射波长是480nm。

产品特征

1)   CAS NO.:480-49-9

2)   化学名:4S,6S,8S,10R,12R,14R,16S,27S-octahydroxy-3R-(1R-hydroxy-hexyl)17,28R-dimethyl- oxacyclooctacosa-17E,19E,21E,21E,23E,25E-pentaen-2-one

3)   同义名:16,20,22,24-Octacosapentenoic acid; 16,20,22,24-Octacosapentenoic acid; 3,5,7,9,11,13,15,26,27- nonahydroxy-2-(1-hydroxyhexyl)-16-methyl-, 27-lactone; NSC3364; NSC-3364;

4)   分子式:C35H58O11

5)   分子量:654.8

6)   纯度:≥90%

7)   外观:固体

8)   溶解性:溶于DMSO(10mg/ml)、DMF(5mg/ml)、乙醇(1mg/ml)、DMSO:PBS(pH 7.2)(1:4)(0.2mg/ml)

9)   化学结构式:

保存与运输方法

保存:-20℃避光干燥保存,至少2年有效。

运输:室温运输。

注意事项

1)  关于化合物溶解性:产品特性内的“≥”表明溶于标示浓度,但饱和溶解度未知。不同批次化合物的溶解度会有差异。

2)  为了让化合物更好的溶解,可通过37℃加热或(和)超声波水浴中震动片刻来处理。若实验所需浓度过大甚至达产品溶解极限,请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。

3)  菲律宾菌素 III与胆固醇的相互作用会改变吸收和荧光光谱,为此,在做荧光显微镜成像分析时,使用340-380nm作为激发波长,385-470nm作为发射波长。

4)  菲律宾菌素 III的荧光染色漂白非常迅速,因此,染色后样本务必尽快分析。

5)  菲律宾菌素 III溶液对光和空气都非常敏感。条件允许的话,配置好的溶液分装冻存,且充入惰性气体,-80℃分装冻存,避免反复冻融。

6)  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作流程

以下是针对细胞样本的染色方法,仅作参考。用户需根据实际染色样本和染色条件来优化。

1、  储存液的制备

将低温保存的固体平衡至室温至少20min,低速离心后,于无菌工作台内加入适量有机溶剂(比如:无水高质量DMSO)配置成10mg/ml(=15.2718mM)的储存液。

2、工作液的制备

于正式实验前,用PBS、HBSS或其他生理缓冲液稀释储存液,到所需的工作浓度,比如:10-100μg/ml。最佳的工作浓度请参阅文献或自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。

2、  染色步骤(室温进行)

应用示例(来自文献,仅做参考)

1)   用Filipin III进行染色,验证MβCD处理后细胞膜胆固醇水平的降低。Vero细胞铺板在96孔板,用不同浓度的MβCD(2.5, 5, 7.5和10 mM)诱导处理45 min。用冰PBS清洗3次,细胞用4%多聚甲醛固定。之后,细胞膜胆固醇用稀释于PBS的50μg/ml Filipin III(储存液溶于DMSO,浓度是25mg/ml)孵育2h。高容量成像系统基于Filipin III的荧光强度来定量细胞膜胆固醇水平。【文献来源:PMID: 33224131; PMCID: PMC7667042.】

 

(B) Vero cells were plated in 96-well plates and treated with various concentrations of MβCD (2.5, 5, 7.5, and 10 mM) for 45 min. Cell membrane cholesterol was labeled with 50 μg/mL filipin III, and images were acquired with the Operetta CLSTM High-Content Analysis System.

2)   用Filipin III进行染色,验证U18666A诱导吞噬体样囊泡中的胆固醇积累。CU428和II8G-IA细胞用2μM U18666A或溶剂对照处理15min,之后加入26 μM胆固醇。1h后,样本转移到离心管,清洗后重悬于100μl Tris-HCl,加入等体积4%多聚甲醛-3.4%蔗糖室温固定15min。用PBS清洗后,重悬于100μl PBS中,加入50μg/ml Filipin III(储存液溶于DMSO,浓度是5mg/ml,充入氮气后,-80℃冻存)室温孵育1h,保持震荡,最后细胞清洗2次后,重悬于40μl PBS,滴加到载玻片上进行观察和成像分析。用UV-2A 滤波器组合观察,用Fiji软件进行成像处理和数据分析。【文献来源:Hernández, J., Gabrielli, M., Costa, J. et al. Phagocytic and pinocytic uptake of cholesterol in Tetrahymena thermophila impact differently on gene regulation for sterol homeostasis. Sci Rep 11, 9067 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-88737-z】

(b) Fluorescent microscopy. CU428 and II8G-IA cells were pretreated with 2 μM U18666A or vehicle for 15 min prior to the addition of 26 μM cholesterol. Untreated cells are designated as Control. After 1 h, cells were fixed, stained with Filipin and examined by fluorescence microscopy. Arrows indicate large, phagosome-like vesicles and arrowheads indicate selected small vesicles that were also observed in some cells. To improve visualization, some of the background fluorescence of CU428 cells was allowed, although II8G-IA cells required more contrast stretching as fluorescence levels were identical between treatments. Scale bar = 50 μm. Results shown are representative experiment repeated three times with similar results.

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其他信息

重量 50 克
品牌:

懋康MKBio

CAS:

480-49-9

规格:

500µg

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