描述
BL21 Star (DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
产品标签:
BL21 (DE3);Rosetta (DE3);Rosetta (DE3);表达感受态细胞;pET表达载体;IPTG诱导;
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货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
MF2334-1000UL | BL21 Star (DE3) Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl | 396 |
MF2334-5000UL | BL21 Star (DE3) Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 50×100μl | 1696 |
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产品组分:
组分编号 | 组分名称 |
货号(规格) |
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MF2334-1000UL | MF2334-5000UL | ||
MF2334-A | BL21 Star (DE3) Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2334-B | Control Plasmid puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
BL21 Star (DE3) 菌株来源于BL21(DE3)菌株,DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),IPTG用来诱导T7 RNA聚合酶的表达。该菌株携带一突变的rne基因(rne131),编码合成截短的RNase E,此酶丧失mRNA降解能力从而提高mRNA转录体的稳定性和增加蛋白产量。另外,BL21 Star (DE3)是大肠杆菌B/r菌株,缺乏lon和外膜蛋白酶OmpT,降低外源重组蛋白的被降解,进一步增加了蛋白表达率。BL21 Star (DE3) 菌株特别设计适用于低拷贝,T7启动子表达载体的非毒性蛋白的高水平表达。与BL21菌株相比, mRNA稳定性提高,BL21 Star菌株由于提高的mRNA稳定性,呈现出更高的异源基因基础表达,因此不适合毒性蛋白表达。
BL21 Star (DE3) 菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm rne131(DE3)
产品描述
本品是大肠杆菌BL21 Star (DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件:
保存:-80℃保存,六个月有效。
运输:干冰运输。
注意事项
1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。
2) 最好在冰上融化感受态细胞。
3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1) 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内,置于冰浴中。【注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】
以下实验以100 μl感受态细胞为例。
2) 向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀(或用手轻弹管轻轻混匀),冰浴静置30min。
3) 42℃热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。
4) 向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5) 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。
【注意】:
a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利福平 | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】