描述
BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
产品标签：
BL21 Star (DE3) pLysS；Rosetta (DE3)；BL21 (DE3)；表达感受态细胞；pET表达载体；IPTG诱导；非毒性蛋白表达；
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| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| MF2336-1000UL | BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl | 396 |
| MF2336-5000UL | BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 | 50×100μl | 1696 |
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产品组分：
| 组分编号 | 组分名称 |
货号（规格） |
|
| MF2336-1000UL | MF2336-5000UL | ||
| MF2336-A | BL21-AI Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
| MF2336-B | Control Plasmid puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
BL21-AI菌株来源于BL21菌株，是一种大肠杆菌B/r菌株（E. Coli B/r）。含有一个染色体整合的编码T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的基因到araBAD操纵子的araB位点，通过操控araBAD启动子来调节T7 RNA聚合酶的表达。此菌株已经敲除araB基因。tetA基因赋予四环素抗性，允许用四环素来验证菌株。
由于T7 RNAP基因位于araBAD操纵子的araB位点，因此，可通过糖类（L-阿拉伯糖和葡萄糖）来调节T7 RNA聚合酶的表达。在培养基内加入L-阿拉伯糖，能够诱导araBAD启动子下游T7 RNA聚合酶表达，进而促进目的蛋白表达；而在培养基加入葡萄糖，能够抑制araBAD启动子下游T7 RNA聚合酶表达，进而抑制目的蛋白表达。BL21-AI菌株适用于任何以T7启动子为基础的表达载体，进行高水平的重组蛋白表达。由于T7 RNA聚合酶的表达水平能被高度调控，该菌株特别适用于表达对其他BL21菌株有毒或抑制生长的蛋白。
BL21-AI菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶OmpT的基因，这两种酶的缺失能够降低外源重组蛋白在菌体内的降解，从而增加了蛋白表达量。最终，BL21-AI菌株表达所得的重组蛋白产量与其他BL21菌株相近。
BL21-AI菌株基因型：F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA
需求条件
建议在以下几个情况下选择BL21-AI菌株来表达您的目的基因：
a） 正在使用T7启动子为基础的表达载体（高拷贝或低拷贝皆可）
b） 当使用其他BL21菌株发现生长抑制现象（比如毒性）
c） 正要表达一种已知的毒性蛋白
产品描述
本品是大肠杆菌BL21-AI菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热激转化。特别适合任何以T7启动子为基础的表达载体系统，且要求严格调控和大量表达毒性蛋白的应用。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，六个月有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
2） 最好在冰上融化感受态细胞。
3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀，冰浴静置25min。
2） 42℃热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。
3） 向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
4） 低速离心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。
【注意】：
a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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| MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 | 5g |
| MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 | 10g |
| MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利福平 | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】