GDNA提取的目的和成功秘诀

在学习gDNA时,经常出现的问题是“ gDNA提取的目的是什么?”

g DNA提取的目的

基因组DNA(gDNA)提取是生命科学中最普遍使用的程序之一。gDNA包含生物体的所有遗传,染色体物质,并编码生命必需的所有成分。gDNA提取的目的是将这种遗传物质与细胞的其余部分(蛋白质,RNA,细胞膜等)分开。纯化后,科学家可以研究单个基因,对整个基因组进行测序,修饰DNA片段等。

但是,所有这些下游应用都从基因组DNA纯化开始。因此,重要的是要确保您获得的是最优质的DNA。这就是为什么我们汇编了有关gDNA纯化的最佳技巧的列表。

如何从gDNA提取中获得更多

或多或少的样品

每个样品都是唯一的,并且DNA含量不同。一些样本类型(例如,肌肉组织)含有少量的DNA,而其他样本(例如,有核血液)则充满了过量的DNA。遵循上样指南是一种好习惯,因为过多的样品会导致色谱柱堵塞而影响试剂盒性能。有时少即是多!

g DNA提取的样品类型

任何gDNA提取的第一步是裂解细胞,以破坏细胞膜并释放内含物。完成裂解步骤至关重要。裂解不当会大大降低产量(因为DNA被困在细胞内)或降低纯度(因为过量的细胞碎片会渗出盐分)。为确保最佳裂解条件,请考虑您开始使用的样品类型。

细胞与生物液

  • 细胞和生物体液(血液,精液,唾液,牛奶等)通常是直截了当的,需要在55°C快速消化蛋白酶K。如果样品在消化后是完全均质的,那您就应该做好了!

组织

  • 由于组织是3D固体基质,因此需要更强烈的裂解程序。消化组织的最快方法是切开样品(尽可能小)以增加表面积。这为蛋白酶K提供了更多的空间来分解组织的小部分。这样做将大大加快消化时间,因此您无需隔夜孵育。

其他一切

  • 无论样品是什么,Zymo Research的化学试剂都可以从甚至最困难的样品类型(如蜂蜜或粪便)中纯化DNA。

技巧-缓慢而稳定

当涉及gDNA提取时,最好的技巧之一就是以您最舒适的速度进行操作。无论是去除离心柱,放入新的收集管中还是用正确的缓冲液洗涤,处理都在DNA提取性能中发挥着重要作用。

纯洗脱液的提示

大多数结合缓冲液均含有盐。如果它们进入洗脱液,则会大大降低260/230的比例,并导致制备不纯。您可以尝试几种方法来帮助减少最终DNA洗脱液中的盐污染量。

  • 确保使用适当的离心速度从色谱柱和基质中完全去除这些盐。
  • 用乙醇洗涤缓冲液彻底洗涤色谱柱,以防止溅回和盐分污染。我们建议沿移液管的壁运行移液器吸头以冲洗掉所有盐。
  • 如果您使用的是带帽色谱柱,请尝试在清洗步骤中倒置封闭的色谱柱,以除去可能溅到帽上的任何痕量盐。
  • 请务必注意列的提示。不要让它接触任何绑定缓冲区。对于那些要特别小心的人,我们建议每次洗涤时使用新的收集管。
  • 除基质外,不要让洗脱缓冲液接触色谱柱的任何部分。如果是这样,您将冒着拾起可能尚未洗掉的痕量盐的风险。

完成-在洗脱液中获得更多DNA

洗脱步骤是整个工作流程中最关键的步骤之一。在此步骤中,您将需要决定产量或浓度。更大的洗脱体积可以回收更多的DNA。但是,如果您需要非常浓缩的样品,则总的DNA产量会更低。在将洗脱缓冲液添加到色谱柱之前,请记住这一点。

将洗脱缓冲液加热到55°C有助于提高洗脱效率。

秘诀–将洗脱液重新装回到色谱柱上,以获取色谱柱上可能残留的所有DNA。然后孵育5分钟,然后旋转进行第二次洗脱。根据样品的不同,这可以使产量最多提高5%。

从生物体液和组织中回收DNA-提示

通过记住以下gDNA提取技巧,可以从生物体液和组织中回收高质量的DNA:

  • 适当的样品量
  • 完全裂解
  • 适当的样品量
  • 洗脱条件
  • 减轻程序错误

提取DNA可能很困难,但是希望这些技巧可以帮助您充分利用gDNA制备物。

首次纯化

为了从任何样品中纯化高质量,超纯DNA的最简单方法,请务必尝试使用Quick- DNA Miniprep Plus试剂盒。使用试剂盒之前,请牢记这些重要建议,以确保您可以在所有下游测定中获得最佳的基因组DNA。